上海宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測常見問題分析

目前通過Vero細胞培養(yǎng)的病毒有狂犬病病毒、脊髓灰質炎病毒等，種類繁多，工藝也各有千秋。湖州申科生物Vero細胞裂解型HCP殘留檢測試劑盒（一步酶聯(lián)免疫吸附法）針對工藝過程中Vero細胞裂解后產生的大量不同種類的HCPs，可定量檢測使用Vero細胞系生產并通過細胞裂解工藝收獲的生物制品中宿主細胞蛋白的殘留檢測，抗體與校準品可覆蓋近3000種蛋白。試劑盒操作簡便，提高實驗人員的時間利用率。試劑盒抗體覆蓋率為65.1%-85.1%（IMBS-2D）和76.9%(IMBS-MS，Unique Peptide≥2）。試劑盒嚴格遵循ISO13485質量體系進行生產，并按照法規(guī)要求進行了性能驗證，各項性能滿足Vero宿主細胞蛋白檢測需求。

HCP是由宿主細胞（通常是哺乳動物細胞或微生物）產生的蛋白質。這些蛋白質具有潛在的風險，可能會影響藥物的安全性和有效性。因此，HCP殘留量是生物藥物中一個關鍵質量屬性，要求在藥物的開發(fā)和生產階段對HCP的存在進行嚴格的監(jiān)控、管理和記錄。隨著生產流程，生物制品的純度在逐漸提高，HCPs總量和種類卻在持續(xù)降低，這使得對HCP的分析和監(jiān)測工作變得更加具有挑戰(zhàn)性。在這種情況下，開發(fā)高效的HCP富集材料和技術變得尤為關鍵。低豐度宿主殘留蛋白富集試劑盒，專為生物制品（如單抗、融合蛋白等）中HCP的富集和去除高豐度蛋白而設計，利用磁珠法構建了一個多樣化且復雜的親和配體庫，旨在高效地識別并結合目標蛋白。其設計不僅針對傳統(tǒng)的單一蛋白，還能適用于融合蛋白、單克隆抗體等多種生物樣本類型，展現(xiàn)了較強的適用性和靈活性。

在宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測的分析方法中， ELISA方法是廣泛應用的，并作為QC日常放行檢測的主要手段。ELISA方法相對簡單、精度良好，方便設定控制范圍和建立技術規(guī)范，適用于產品開發(fā)和過程控制；但ELISA方法檢測依靠抗原抗體特異性結合，因此用存在于生物制品中的HCPs作為免疫原生產出的抗體質量至關重要。無論是商品化ELISA試劑盒，還是自制的多克隆抗體，如果抗體的特異性和適用性不夠高，都有可能帶來HCPs漏檢的風險，從而對生物制品質量安全帶來風險。除此之外，ELISA檢測HCPs使用多克隆抗體，無法針對性的提供高風險HCPs殘留蛋白真實存在情況。

湖州申科生物致力于提供符合嚴格法規(guī)要求的宿主細胞蛋白（HCP）ELISA檢測試劑盒。為確保產品滿足生物制品（如抗體藥、疫苗）申報（如IND/BLA）的監(jiān)管標準，申科構建了全流程依規(guī)開發(fā)的質量體系：整個開發(fā)過程嚴格遵循ISO 13485質量標準，并滿足用戶審計要求。其開發(fā)流程明確包含三個關鍵階段：①HCP殘留定量檢測參考品開發(fā)：關鍵在于建立可靠的HCP抗原參考品，涵蓋抗原的表征、量值溯源與賦值、均一性和穩(wěn)定性考察等，確保檢測的準確性與代表性。②高質量大批量抗體制備：通過優(yōu)化的HCP抗原動物免疫策略，結合嚴謹?shù)目贵w質量標準（如建立標準、覆蓋率驗證）和穩(wěn)定的制備工藝，生產具有高特異性和廣覆蓋度的檢測抗體，保證檢測的特異性和靈敏度。③檢測體系開發(fā)及驗證：進行嚴謹?shù)臋z測體系開發(fā)與驗證工作，其驗證方案符合ICH指導原則及藥典關于分析方法驗證的標準要求。同時，嚴格執(zhí)行物料質控，并在潔凈車間環(huán)境中進行生產，確保試劑盒方法的穩(wěn)健性、重現(xiàn)性與法規(guī)符合性。這一從抗原源頭到成品體系的標準化、合規(guī)化開發(fā)流程，是湖州申科HCP檢測產品品質與可靠性的根本保障。

湖州申科生物致力于開發(fā)接近實際工藝的商業(yè)化宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測試劑盒，通過不同工藝的HCP差異化分析，針對性輸出不同細分工藝領域的HCP檢測試劑盒。實驗數(shù)據(jù)表明：針對CHO-S與CHO-K1兩種宿主細胞，二者共享2458種共同HCP（占比79.7%），但分別存在392種與236種特異HCP，凸顯工藝差異導致的殘留蛋白特異性。進一步對比B3表達菌與K2克隆菌，二者雖共享1489種相同蛋白（占比88%和85%），但仍分別檢出208種和258種獨有蛋白，差異率達12%-15%。這些發(fā)現(xiàn)直接驗證不同工藝路線與克隆選擇會影響HCP殘留譜的組成。因此，湖州申科提出"工藝定制化檢測"策略——通過準確識別共性及特異HCP，針對性開發(fā)細分試劑盒產品。

為什么定制化試劑盒是宿主細胞蛋白殘留檢測的優(yōu)先選擇？原因之一是建立定制化檢測體系，更滿足商業(yè)化生產HCP工藝雜質控制要求。在HCP校準品和HCP抗體兩大關鍵試劑組分滿足要求的前提下，定制化方法的建立和優(yōu)化是基于真實純化中間品和原液樣品進行，通過優(yōu)化檢測條件，提高對低濃度HCPs的檢測靈敏度，滿足工藝驗證和過程控制要求。在臨床三期，生產工藝需要進行系統(tǒng)驗證，以確保其穩(wěn)定性和可重復性。定制化HCP ELISA檢測方法能夠更準確地監(jiān)測生產工藝中HCP的去除效果，為工藝驗證提供有力支持。在過程控制中，通過工藝特異型的HCP ELISA檢測方法，可以實時監(jiān)測生產過程中的HCP水平，具備更強的生產異常預警能力，及時發(fā)現(xiàn)生產風險，確保產品質量的穩(wěn)定性。