上海生物制品宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法學驗證

來源： 發(fā)布時間：2025-08-29

宿主細胞殘留蛋白（HCP）檢測是生物制品質量控制的關鍵環(huán)節(jié)，采用基于抗體的免疫學方法（如ELISA）。然而，不同試劑盒之間的檢測結果常存在明顯差異，關鍵原因在于其依賴的關鍵組分——HCP校準品和檢測抗體——本身制備與表征的高度可變性。校準品作為定量的基準，其復雜性極大。不同供應商在制備時使用的細胞來源、培養(yǎng)及表達條件、宿主蛋白提取純化工藝（例如目標產物去除策略）差異明顯，導致校準品的組成、代表性及穩(wěn)定性各不相同。同樣，檢測抗體（尤其是多抗）通過免疫動物獲得，其特異性與覆蓋度受免疫原、動物應答個體差異、免疫方案及后續(xù)抗體篩選/純化過程的影響巨大，不同批次或來源抗體的識別譜（如對不同HCP的親和力、對低豐度蛋白的靈敏度）存在本質差別。正是這些關鍵組分固有的明顯變異度，導致不同試劑盒對同一樣本的檢測結果在數值上、甚至特定HCP的檢出能力上可能出現(xiàn)較大偏差。因此，為確保檢測結果真實反映自身產品的HCP殘留情況，企業(yè)應結合自身產品特性和工藝，對不同試劑盒進行詳細的平行比對與適用性評估，以篩選出匹配度較高的檢測方案。
生物制品臨床申報需提交 HCP 抗體覆蓋率數據，否則可能面臨監(jiān)管發(fā)補要求。上海生物制品宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法學驗證

上海生物制品宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法學驗證,宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測

大腸桿菌具有遺傳性狀清晰，易于培養(yǎng)和控制，表達水平高，成本低，周期短等特點，是優(yōu)先的經濟實惠的蛋白表達系統(tǒng)，K-12系列和B系列菌株是工業(yè)規(guī)模上常用于生物工程的E.coli細菌株。K-12菌種、所衍生出的DH5α、Top10、JM109等菌株，可用于大量生產質粒DNA并進一步制備細胞基因治療產品和病毒載體類疫苗。源于B系的菌株，如BL21，更適用于高效轉染表達載體和常規(guī)蛋白的表達，如：病毒蛋白、重組蛋白疫苗、細胞因子、酶類等產品。湖州申科生物針對這兩種菌株的特點，分別開發(fā)了E.coli表達菌HCP殘留檢測試劑盒和E.coli克隆菌堿裂HCP殘留檢測試劑盒。
江蘇生物制品宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測免疫策略宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測對保障生物制品安全性和有效性至關重要。

上海生物制品宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法學驗證,宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測

宿主細胞蛋白（HCP）作為生物制品中來源于細胞基質的殘留雜質，具有明顯的異質性特征。其復雜性體現(xiàn)在三個方面：①理化特性差異：HCP涵蓋胞內及分泌蛋白，涉及關鍵生理功能，具有涵蓋區(qū)間大的等電點（pI 3-11）、分子量范圍（5-250kDa）及疏水性；②上游工藝影響：不同發(fā)酵工藝（如細胞株、培養(yǎng)條件）誘導獨特的翻譯后修飾（PTM），導致HCP總量與生化復雜性增加；③下游工藝與產物特性干擾：抗體、細胞因子等重組蛋白或病毒類藥物的純化工藝會選擇性殘留特定HCP，且產物形式（如大腸桿菌的包涵體/可溶性表達）直接影響HCP殘留譜。針對特定生產工藝開發(fā)定制化檢測方案是準確監(jiān)控宿主細胞蛋白殘留的關鍵。

在宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測的分析方法中， ELISA方法是廣泛應用的，并作為QC日常放行檢測的主要手段。ELISA方法相對簡單、精度良好，方便設定控制范圍和建立技術規(guī)范，適用于產品開發(fā)和過程控制；但ELISA方法檢測依靠抗原抗體特異性結合，因此用存在于生物制品中的HCPs作為免疫原生產出的抗體質量至關重要。無論是商品化ELISA試劑盒，還是自制的多克隆抗體，如果抗體的特異性和適用性不夠高，都有可能帶來HCPs漏檢的風險，從而對生物制品質量安全帶來風險。除此之外，ELISA檢測HCPs使用多克隆抗體，無法針對性的提供高風險HCPs殘留蛋白真實存在情況。
HCP具有異質性，體現(xiàn)在分子本身的多樣性以及和工藝相關的變異性。

上海生物制品宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法學驗證,宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測

中國倉鼠卵巢細胞（Chinese Hamster Ovary，CHO）是抗體、重組蛋白、疫苗等生物制品生產中普遍使用的動物細胞表達系統(tǒng)。在使用CHO宿主生產過程中，不可避免的會引入宿主細胞蛋白（HCP）雜質，即使較低殘留水平下，HCPs也會存在免疫原性，降低產品蛋白穩(wěn)定性等的風險。因此需對生物制品中殘留的HCP進行定量分析，以保證純化工藝的一致性和終產品的安全性。SHENTEK®CHO HCP檢測試劑盒實現(xiàn)關鍵試劑全國產化，采用CHO 細胞（K1&S）補料分批培養(yǎng)工藝制備HCPs 免疫綿羊，獲得專門的抗體，用于CHO細胞系表達的生物制品(單抗，重組蛋白，疫苗等)中宿主細胞蛋白的殘留檢測。本試劑盒操作步驟少、快速、檢測專一性強、性能穩(wěn)定可靠。
深入分析宿主細胞蛋白殘留檢測的數據，能為生產工藝的優(yōu)化調整提供明確方向。廣東工藝特異型宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法開發(fā)

湖州申科宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測產品幾乎覆蓋抗體、重組蛋白、疫苗及細胞基因治療領域的頭部企業(yè)。上海生物制品宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法學驗證

湖州申科生物建立了專業(yè)化宿主細胞蛋白殘留檢測平臺，利用 ELISA 方法分析宿主細胞蛋白總量，嚴格把控CV差異和回收率結果，保證實驗結果真實性，開發(fā)的試劑盒或抗體具有靈敏度高、特異性強等特點。在技術服務方面，平臺提供兩類關鍵支撐：一是覆蓋多種宿主（包括CHO、E.coli，酵母等）的殘留HCP檢測服務，直接輸出蛋白殘留量及樣品回收率數據；二是配套的樣品適用性驗證體系，通過基質定量下限驗證、樣品稀釋度驗證、準確性驗證及精密度驗證（含重復性與中間精密度）等多維度檢測方案，結合完整的試劑盒性能報告，確保檢測結果的準確性與可溯源性，為生物制品工藝雜質控制提供可靠保障。
上海生物制品宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法學驗證