在原核表達系統(tǒng)中外源基因不僅進行正向轉(zhuǎn)錄,有時還存在反向轉(zhuǎn)錄(即生成反義RNA),這種現(xiàn)象往往是外源基因表達不高的重要原因。另外,在真核系統(tǒng),某些基因也存在反向轉(zhuǎn)錄,產(chǎn)生反義RNA,參與自身表達的調(diào)控。在這些情況下,要準(zhǔn)確測定正向和反向轉(zhuǎn)錄水平就不能用雙鏈DNA探針,而只能用RNA探針或單鏈DNA探針。探針是能與特異靶分子反應(yīng)并帶有供反應(yīng)后檢測的合適標(biāo)記物的分子。利用核苷酸堿基順序互補的原理,用特異的基因探針即識別特異堿基序列的有標(biāo)記的一段單鏈DNA(或RNA)分子,與被測定的靶序列互補,以檢測被測靶序列的技術(shù)叫核酸探針技術(shù)。探針制備就是將目的基因進行標(biāo)記。分析對象是固體物質(zhì)表面細小顆粒或微小區(qū)域,小范圍直徑為1μm。靜安區(qū)特制探針生產(chǎn)廠家
早期采用的RNA探針是細胞mRNA探針和病毒RNA探針,這些RNA是在細胞基因轉(zhuǎn)錄或病毒復(fù)制過程中得到標(biāo)記的,標(biāo)記效率往往不高,且受到多種因素的制約。這類RNA探針主要用于研究目的,而不是用于檢測。例如,在篩選逆轉(zhuǎn)錄病毒人類免疫缺陷病毒(HIV)的基因組DNA克隆時,因無DNA探針可利用,就利用HIV的全套標(biāo)記mRNA作為探針,成功地篩選到多株HIV基因組DNA克隆。又如進行中的轉(zhuǎn)錄分析(nuclearrunontranscrip-tionassay)時,在體外將細胞核分離出來,然后在α-32P-ATP的存在下進行轉(zhuǎn)錄,所合成mR-NA均摻入同位素而得到標(biāo)記,此混合mRNA與固定于硝酸纖維素濾膜上的某一特定的基因的DNA進行雜交,便可反映出該基因的轉(zhuǎn)錄狀態(tài),這是一種反向探針實驗技術(shù)。嘉定區(qū)質(zhì)量探針銷售廠家探針卡是一種測試接口,主要對裸芯進行測試,通過連接測試機和芯片,通過傳輸信號對芯片參數(shù)進行測試.。
3 面分析用于測定某種元素的面分布情況。方法是將X射線譜儀固定在所要測量的某元素特征X射線信號的位置上,電子束在樣品表面做光柵掃描,此時在熒光屏上便可看到該元素的面分布圖像。顯像管的亮度由試樣給出的X射線強度調(diào)制。圖像中的亮區(qū)表示這種元素的含量較高。定量分析定量分析時,先測得試樣中Y元素的特征X射線強度IY,再在同一條件下測出已知純元素Y的標(biāo)準(zhǔn)試樣特征X射線強度IO。然后兩者分別扣除背底和計數(shù)器死時間對所測值的影響,得到相應(yīng)的強度值IY和IO,兩者相除得到X射線強度之比KY= IY / IO。 直接將測得的強度比KY當(dāng)作試樣中元素Y的重量濃度,其結(jié)果還有很大誤差,通常還需進行三種效應(yīng)的修正。即原子序數(shù)效應(yīng)的修正,吸收效應(yīng)修正,熒光效應(yīng)修正。經(jīng)過修正,誤差可控制在±2%以內(nèi)。
電子探針儀鏡筒部分的構(gòu)造大體上和掃描電子顯微鏡相同,只是在檢測器部分使用的是X射線譜儀、專門用來檢測X射線的特征波長或特征能量,以此來對微區(qū)的化學(xué)成分進行分析。因此,除專門的電子探針儀外,有相當(dāng)一部分電子探針儀是作為附件安裝在掃描電鏡或透射電鏡鏡筒上,以滿足微區(qū)組織形貌、晶體結(jié)構(gòu)及化學(xué)成分三位一體同位分析的需要 [1]。用波長色散譜儀(或能量色散譜儀)和檢測計數(shù)系統(tǒng),測量特征X射線的波長(或能量)和強度,即可鑒別元素的種類和濃度。探針卡是IC制造中對制造成本影響相當(dāng)大的重要制程之一。
探針的標(biāo)記方式有放射性標(biāo)記和非放射性標(biāo)記。標(biāo)記物質(zhì)有放射性元素(如32P等)和非放射性物質(zhì)(如生物素、地高辛等)。32P是**常用的核苷酸標(biāo)記同位素,被標(biāo)記的dNTP本身就帶有磷酸基團,便于標(biāo)記。特點是比活性高,可達9000Ci/mmol;發(fā)射的β射線能量高。用它標(biāo)記的探針自顯影時間短,靈敏度高。32P的半壽期短,雖使用不方便,但為廢棄物的處理減輕了壓力。非放射性標(biāo)記法有酶標(biāo)法和化學(xué)物標(biāo)記法。酶標(biāo)方法與免疫測定ELISA方法相似,只是被標(biāo)記的核酸代替了被標(biāo)記的抗體,事實上被標(biāo)記的抗體也稱為探針,現(xiàn)有許多商品是生物素、地高辛標(biāo)記的。能進行微區(qū)分析。可分析數(shù)個μm3內(nèi)元素的成分。靜安區(qū)特制探針生產(chǎn)廠家
可以進行點、線掃描(得到層成分分布信息)、面掃描分析(得到成分面分布圖像)。靜安區(qū)特制探針生產(chǎn)廠家
探針的標(biāo)記也可以采用隨機引物法,即向變性的探針溶液加入6個核苷酸的隨機DNA小片段,作為引物,當(dāng)后者與單鏈DNA互補結(jié)合后,按堿基互補原則不斷在其3’OH端添加同位素標(biāo)記的單核苷酸,這樣也可以獲得比放射性很高的DNA探針。DNA探針是以病原微生物DNA或RNA的特異性片段為模板,人工合成的帶有放射性或生物素標(biāo)記的單鏈DNA片段,可用來快速檢測病原體。DNA探針將一段已知序列的多聚核苷酸用同位素、生物素或熒光染料等標(biāo)記后制成的探針。可與固定在硝酸纖維素膜的DNA或RNA進行互補結(jié)合,經(jīng)放射自顯影或其他檢測手段就可以判定膜上是否有同源的核酸分子存在。靜安區(qū)特制探針生產(chǎn)廠家
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