熒光定量 PCR 儀是一種通過熒光染料或熒光標記的特異性探針,對 PCR 產(chǎn)物進行標記跟蹤,實時監(jiān)測反應過程的儀器。工作原理:在 PCR 反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個 PCR 進程。隨著 PCR 擴增的進行,每經(jīng)過一個循環(huán),熒光信號就會相應增加。通過檢測熒光信號的變化,就可以判斷 DNA 的擴增情況,進而實現(xiàn)對初始模板的定量分析。常用的熒光化學物質(zhì)有 TaqMan 熒光探針和 SYBR 熒光染料等。TaqMan 探針法中,探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR 擴增時,Taq 酶的 5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號。SYBR Green Ⅰ 法中,SYBR 熒光染料特異性地摻入 DNA 雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的 SYBR 染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與 PCR 產(chǎn)物的增加完全同步。一些先進的 TET 熒光定量 PCR 儀采用了冷 CCD(電荷耦合器件)或 PMT(光電倍增管)作為熒光探測器;無錫熒光熒光定量PCR儀品牌排行
熒光信號強度異常信號值不穩(wěn)定:在相同的實驗條件下,對同一標準樣品進行多次檢測,若熒光信號強度波動較大,如原本穩(wěn)定的信號值出現(xiàn)明顯的忽高忽低,且排除了樣品制備、反應體系等其他因素的影響,可能是光路系統(tǒng)出現(xiàn)問題,需要校準。信號值偏低或偏高:與以往正常實驗結(jié)果相比,熒光信號強度明顯偏低或偏高。例如,正常情況下某種樣品在特定循環(huán)數(shù)下的熒光值應該在一定范圍內(nèi),但現(xiàn)在檢測到的數(shù)值遠低于或遠高于該范圍,且排除了試劑、儀器參數(shù)設置等因素,可能是光路系統(tǒng)的熒光激發(fā)或檢測效率發(fā)生變化,需要對光路系統(tǒng)進行檢查和校準。江蘇VIC熒光定量PCR儀要多少錢升降溫速度慢則會使實驗時間延長,也可能影響擴增效率。
熒光染料法原理:一些熒光染料(如 SYBR Green I)能特異性地結(jié)合到雙鏈 DNA 上。在 PCR 反應體系中,隨著 DNA 擴增產(chǎn)物的不斷增加,與雙鏈 DNA 結(jié)合的熒光染料也越來越多,熒光信號強度與 PCR 產(chǎn)物的數(shù)量呈正相關。通過檢測熒光信號的強度變化,就可以實時監(jiān)測 PCR 反應的進程。過程:在 PCR 反應的每一個循環(huán)中,當溫度降低到退火溫度時,引物與模板結(jié)合,DNA 聚合酶開始延伸引物,合成新的 DNA 鏈。此時,熒光染料會結(jié)合到新合成的雙鏈 DNA 上,儀器會在特定的時間點檢測熒光信號的強度。隨著循環(huán)次數(shù)的增加,熒光信號逐漸增強,當信號強度達到設定的閾值時,對應的循環(huán)數(shù)被稱為閾值循環(huán)數(shù)(Ct 值)。定量依據(jù):在一定的范圍內(nèi),起始模板量與 Ct 值呈對數(shù)關系。即起始模板量越多,達到閾值所需的循環(huán)數(shù)越少,Ct 值越??;反之,起始模板量越少,Ct 值越大。通過已知濃度的標準品建立標準曲線,再根據(jù)待測樣本的 Ct 值,就可以在標準曲線上計算出其對應的起始模板量。
熒光定量PCR儀具有高靈敏度、高特異性和精確定量等特點,被廣泛應用于多個行業(yè),以下是一些主要的應用行業(yè):食品行業(yè)食品安全檢測:可檢測食品中的致病微生物,如大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等,以及食品中的轉(zhuǎn)基因成分,保障食品安全,維護消費者的健康權益。食品溯源:通過對食品中特定 DNA 序列的檢測和分析,實現(xiàn)對食品原料的來源追溯和產(chǎn)品質(zhì)量的全程監(jiān)控,有助于建立健全食品質(zhì)量安全追溯體系。環(huán)境監(jiān)測行業(yè)微生物群落分析:對環(huán)境樣品中的微生物進行定量分析和群落結(jié)構研究,了解不同環(huán)境中微生物的種類、數(shù)量和分布規(guī)律,評估環(huán)境質(zhì)量和生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性。污染物降解菌檢測:篩選和檢測環(huán)境中具有污染物降解能力的微生物菌株,為生物修復技術提供理論依據(jù)和菌種資源,推動環(huán)境污染治理和生態(tài)修復工作的開展。擁有高靈敏度的光學檢測系統(tǒng),能夠精確檢測 TET 等熒光染料發(fā)出的微弱熒光信號,保證檢測結(jié)果的準確性。
熒光定量 PCR 儀是一種精密的儀器,正確的維護和保養(yǎng)可以延長其使用壽命,保證儀器的性能和檢測結(jié)果的準確性。長期維護:定期多方面檢查:每年或每兩年對儀器進行一次多方面的檢查和維護,包括機械部件、電子元件、制冷系統(tǒng)等的檢查和保養(yǎng)。由專業(yè)的維修工程師對儀器進行深度保養(yǎng),及時發(fā)現(xiàn)并更換潛在的故障部件,確保儀器的整體性能處于良好狀態(tài)。存放環(huán)境維護:如果儀器長時間不使用,應將其存放在干燥、清潔、溫度適宜的環(huán)境中,避免儀器受到潮濕、灰塵、震動和電磁干擾等影響。定期通電開機,讓儀器運行一段時間,以保持各部件的正常性能??煽焖贆z測食品中的有害微生物,如大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等。無錫Cy5熒光定量PCR儀代理商
準確的熱循環(huán)系統(tǒng)對于保證 PCR 反應的特異性和效率至關重要,進而影響檢測靈敏度。無錫熒光熒光定量PCR儀品牌排行
杭州柏恒熒光定量PCR儀Q9600Pro采用LED光源設計,這一設計不僅實現(xiàn)了節(jié)能環(huán)保,也提高了設備的穩(wěn)定性和使用壽命。LED光源作為一種高效節(jié)能的照明技術,不僅減少了能源的消耗,還減少了對環(huán)境的污染,符合現(xiàn)代社會對可持續(xù)發(fā)展的要求。LED光源的節(jié)能優(yōu)勢體現(xiàn)在多個方面。首先,LED光源在發(fā)光過程中幾乎不會產(chǎn)生熱量,相比傳統(tǒng)的白熾燈泡或熒光燈管,LED的能源利用率更高,能夠在實驗過程中***降低能源消耗。其次,LED光源的發(fā)光原理與傳統(tǒng)燈泡不同,LED是通過半導體發(fā)光,不需要加熱絲或熒光粉等材料,因此功耗更低,使用壽命更長,無需頻繁更換燈管,省去了不必要的維護費用。此外,LED光源的長壽命也是其優(yōu)勢之一。LED的壽命通常可以達到數(shù)萬小時甚至更長,遠遠超過傳統(tǒng)的照明設備,減少了設備的維護頻率和更換成本。LED光源具有低損耗、高穩(wěn)定性的特點,能夠長時間保持穩(wěn)定的光照強度和波長,確保實驗結(jié)果的一致性和可靠性??蒲腥藛T可以更加放心地進行長時間實驗,而不必擔心光源的降解和影響實驗結(jié)果。除了節(jié)能和長壽命外,LED光源還具有無汞、無紫外輻射等環(huán)保特點。LED光源不含有有害物質(zhì),不產(chǎn)生紫外輻射,對實驗樣品和操作人員更加安全無害。同時。 無錫熒光熒光定量PCR儀品牌排行