化妝品改善微循環(huán)功效測(cè)試

斑馬魚(yú)黑色素調(diào)控機(jī)制與人類高度保守，使其成為美白功效評(píng)價(jià)的“可視化工具”。實(shí)驗(yàn)通過(guò)向受精后24小時(shí)斑馬魚(yú)胚胎施加受試物，利用顯微成像技術(shù)定量分析體表黑色素含量變化。例如，某含煙酰胺的精華液可使斑馬魚(yú)胚胎黑色素含量降低42%，且效果與濃度呈劑量依賴關(guān)系。該方法基于酪氨酸酶催化黑色素合成的生化通路，通過(guò)圖像分析軟件（如ImageJ）實(shí)現(xiàn)高通量篩選。相較于人體實(shí)驗(yàn)，斑馬魚(yú)模型可將檢測(cè)周期從28天縮短至72小時(shí)，成本降低70%。目前，歐詩(shī)漫、華熙生物等企業(yè)已建立斑馬魚(yú)美白功效評(píng)價(jià)平臺(tái)，并參與制定T/HPCIA 005-2022標(biāo)準(zhǔn)。然而，斑馬魚(yú)胚胎皮膚滲透性差異可能導(dǎo)致結(jié)果與人體差異，需結(jié)合3D皮膚模型驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)室支持多中心臨床測(cè)試，滿足化妝品新規(guī)下人體功效評(píng)價(jià)的樣本量要求?；瘖y品改善微循環(huán)功效測(cè)試

皮膚外用產(chǎn)品的制造、運(yùn)輸和銷售需要事先進(jìn)行安全性評(píng)估，并評(píng)估可能因預(yù)期用途、誤用、或意外皮膚暴露而導(dǎo)致的皮膚反應(yīng)。離體皮膚的另一重要應(yīng)用是評(píng)估皮膚外用產(chǎn)品的安全性和功效性，這包括日用品、化妝品、藥品、醫(yī)療器械等。BURGHER等人使用腹部整形手術(shù)獲取的人體皮膚外植體研究了氫氟酸的腐蝕性，他們發(fā)現(xiàn)70%的氯氟酸在作用的5分鐘內(nèi)即可完全穿透皮膚，這與之前研究的意外氫氟酸暴露的臨床結(jié)果是一致的均。研究人員在OECDTG439標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)之上，開(kāi)發(fā)了使用離體皮膚模型評(píng)估化合物是否具有潛在刺激性的方法。通過(guò)對(duì)120種化妝品刺激離體皮膚的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與人體斑貼實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，發(fā)現(xiàn)離體皮膚模型檢測(cè)的特異性為89.9%，準(zhǔn)確率為89.1%[46]。此外，科研人員還使用彗星實(shí)驗(yàn)對(duì)手術(shù)獲得的離體皮膚進(jìn)行了化合物遺傳毒性的評(píng)估，通過(guò)將離體皮膚局部暴露于20中化學(xué)物質(zhì)中，他們發(fā)現(xiàn)其遺傳毒性檢測(cè)的靈敏度、特異性和準(zhǔn)確性分別為89%、90%和89%切。這些結(jié)果均表明離體皮膚是外用產(chǎn)品刺激性、腐蝕性、遺傳毒性等評(píng)價(jià)的可靠模型，具有廣泛的應(yīng)用前景。人體功效護(hù)膚品美白證明：采用黑色素含量測(cè)定儀，驗(yàn)證產(chǎn)品抑制酪氨酸酶活性能力。

斑馬魚(yú)肥大細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能與人類相似，為抗過(guò)敏功效評(píng)價(jià)提供了體內(nèi)模型。實(shí)驗(yàn)通過(guò)N-苯甲酰-DL-精氨酸對(duì)硝基苯酰胺鹽酸鹽（BAPNA）底物法檢測(cè)類胰蛋白酶活性，定量評(píng)估過(guò)敏反應(yīng)強(qiáng)度。例如，某含燕麥生物堿的乳液可使斑馬魚(yú)胚胎類胰蛋白酶表達(dá)量降低58%，且過(guò)敏癥狀（如心率異常、運(yùn)動(dòng)遲緩）發(fā)生率減少72%。該方法基于肥大細(xì)胞脫顆粒釋放組胺的免疫機(jī)制，通過(guò)熒光定量PCR檢測(cè)過(guò)敏相關(guān)基因（如IL-4、IL-13）表達(dá)變化實(shí)現(xiàn)機(jī)制驗(yàn)證。相較于豚鼠皮膚致敏實(shí)驗(yàn)，斑馬魚(yú)模型可避免個(gè)體差異導(dǎo)致的假陰性結(jié)果，且實(shí)驗(yàn)周期從42天縮短至7天。目前，完美、養(yǎng)生堂等企業(yè)已將斑馬魚(yú)抗過(guò)敏評(píng)價(jià)納入產(chǎn)品備案體系。

斑馬魚(yú)通過(guò)檢測(cè)彈性蛋白基因eln1、eln2表達(dá)量評(píng)估皮膚緊致度。實(shí)驗(yàn)將4dpf斑馬魚(yú)幼魚(yú)暴露于受試物中24小時(shí)，通過(guò)qRT-PCR檢測(cè)基因表達(dá)變化。例如，某抗皺精華液可使eln1基因表達(dá)量增加1.8倍，且P<0.01，成功通過(guò)國(guó)家藥監(jiān)局備案。該技術(shù)依據(jù)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)T/ZHCA015-2022，要求陽(yáng)性對(duì)照組相對(duì)表達(dá)量明顯高于空白對(duì)照組，且需排除溶劑干擾。目前，該模型已被薇諾娜等品牌用于原料初篩，明顯縮短研發(fā)周期。斑馬魚(yú)胚胎透明特性使其成為美白功效評(píng)價(jià)的天然模型。實(shí)驗(yàn)利用ImageJ軟件分析受精后48小時(shí)胚胎背部黑色素含量，計(jì)算抑制率。例如，某樹(shù)莓苷樣品在0.1mg/mL濃度下，黑色素抑制率達(dá)42%，且P<0.05，驗(yàn)證其美白效果?？寡趸πt通過(guò)檢測(cè)活性氧（ROS）清理能力評(píng)估，斑馬魚(yú)胚胎代謝異常時(shí)ROS水平升高，受試物可降低ROS熒光強(qiáng)度。例如，某植物提取物可使ROS水平降低30%，證實(shí)其抗氧化能力。恒溫恒濕環(huán)境準(zhǔn)確控制溫濕度波動(dòng)，保障化妝品穩(wěn)定性測(cè)試數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

完整版安評(píng)可采用七類主要原料數(shù)據(jù)類型，包括《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》中的限用組分、國(guó)際有影響力機(jī)構(gòu)評(píng)估結(jié)論、監(jiān)管部門(mén)公布的原料使用信息等。例如，歐盟消費(fèi)者安全科學(xué)委員會(huì)（SCCS）已公布的3651種原料評(píng)估結(jié)論，可為無(wú)有影響力機(jī)構(gòu)評(píng)估報(bào)告的原料提供參考。對(duì)于具有3年使用歷史的原料，若不良反應(yīng)監(jiān)測(cè)未涉及安全風(fēng)險(xiǎn)，且使用濃度不超過(guò)歷史數(shù)據(jù)，可作為評(píng)估依據(jù)。此外，安全食用歷史的原料（如常見(jiàn)食物成分）需提供中國(guó)食物成分表、食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)等證明材料。值得注意的是，淡斑美白劑和防脫發(fā)劑需單獨(dú)驗(yàn)證原料安全性，不可直接引用歷史使用數(shù)據(jù)。天然成分溯源：證書(shū)需標(biāo)注植物提取物活性成分含量及提取工藝認(rèn)證。化妝品改善微循環(huán)功效測(cè)試

人體功效評(píng)價(jià)：證書(shū)需明確標(biāo)注參與測(cè)試人數(shù)、周期及明顯差異分析結(jié)果?；瘖y品改善微循環(huán)功效測(cè)試

盡管用于化妝品評(píng)價(jià)的創(chuàng)新模型和技術(shù)在不斷發(fā)展，但無(wú)論是斑馬魚(yú)模型、體外細(xì)胞模型還是皮膚器官芯片等均不能完全模擬體內(nèi)皮膚的真實(shí)結(jié)構(gòu)與功能，這使得離體皮膚評(píng)價(jià)模型逐漸進(jìn)入人們的視野。離體皮膚也被稱為皮膚外植體，它是由人體來(lái)源的皮膚組織經(jīng)體外培養(yǎng)而獲得的模型[26]。離體皮膚通過(guò)適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)方式，可在體外維持一定的組織活力，目前，已被廣泛應(yīng)用于化妝品功效測(cè)評(píng)、傷口愈合、皮膚相關(guān)疾病的研究中。離體皮膚是接近健康和患病皮膚生理機(jī)能的模型，包含完整的皮膚細(xì)胞類群如角質(zhì)形成細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、黑素細(xì)胞、朗格漢斯細(xì)胞;含有膠原蛋白、彈性蛋白、糖胺聚糖等細(xì)胞外基質(zhì);包含皮膚附屬物如汗腺等叨。本文將在下面章節(jié)重點(diǎn)概述離體皮膚模型及其在化妝品功效評(píng)價(jià)中的應(yīng)用?；瘖y品改善微循環(huán)功效測(cè)試